“老”关节炎新靶点！南方医科大学团队开发智能纳米凝胶，从根源逆转骨关节炎

1、FA-PBA NPs@Gel的构建与表征，并测评其细胞毒性与生物相容性

研究人员通过直接缩聚法合成了聚白桦脂酸（PBA），并进一步制备了FA修饰的PBA纳米颗粒（FA-PBA NPs），并将其负载于温敏性羟丙基壳聚糖水凝胶中。该体系具有优异的可注射性、温敏凝胶化特性及持续释放能力。体外释放实验显示，35天内可释放约85%的药物，表明其具有长效缓释潜力。

通过活/死细胞染色、细胞形态观察和溶血实验，证实FA-PBA NPs@Gel对巨噬细胞和软骨细胞无明显毒性，溶血率低于2%，具备良好的生物相容性。

2、 FA-PBA NPs@Gel靶向M1型巨噬细胞，并促进M1向M2型巨噬细胞转化

通过Dil标记的FA-PBA NPs，结合免疫荧光和流式细胞术，发现FA-PBA NPs@Gel可通过叶酸受体FOLR1特异性内吞至LPS激活的M1巨噬细胞，其摄取量显著高于非激活细胞或游离Dil组。

qPCR、免疫荧光和流式结果显示，FA-PBA NPs@Gel显著下调M1标志物（IL-1β, iNOS, CD86），上调M2标志物（Arg1, TGF-β, CD206），并降低细胞内ROS水平，表明其可有效重塑巨噬细胞表型。

3、 FA-PBA NPs@Gel通过抑制NF-κB通路减少CCL20分泌，抑制CCL20/CCR6轴保护软骨形成

利用抗体芯片（RayBiotech, GSM-CHE-1,检测小鼠样本中25种趋化因子）筛选发现，FA-PBA NPs@Gel显著下调巨噬细胞分泌的CCL20。进一步实验证实，其通过抑制CCL20/CCR6信号通路，改善软骨细胞形态、促进增殖与迁移，并上调软骨合成相关基因（Aggrecan, SOX9, Col2a1），下调降解相关基因（MMP13, MMP3, MMP2）。

进一步机制探索中RNA-seq与KEGG分析显示，FA-PBA NPs@Gel显著抑制NF-κB通路激活。Western blot和免疫荧光证实其抑制p65磷酸化与核转位，并下调NF-κB下游基因表达。

4、分子对接实验表明，BA直接靶向GSK3β蛋白以抑制NF-κB通路

通过DARTS-MS联合分子对接、CETSA和分子动力学模拟，发现BA直接结合GSK3β的Glu-97位点，增强其蛋白稳定性，从而抑制NF-κB通路激活。

5、FA-PBA NPs@Gel在体内缓解滑膜炎并具备良好生物相容性，并改善软骨破坏与软骨下骨异常

在ACLT诱导的OA模型中，FA-PBA NPs@Gel显著改善滑膜增生、减少M1巨噬细胞浸润、提升M2比例，并降低血清CCL20水平。组织学与血液生化分析证实其具有良好的体内安全性

SOFG染色、H&E染色及Micro-CT分析显示，FA-PBA NPs@Gel有效减轻软骨退化、促进ECM合成，并改善软骨下骨结构参数（BV/TV, Tb.Th, Tb.Pf），表明其在结构层面对OA具有治疗作用。