什么是分泌蛋白质组？

 

 

“分泌组（Secretome）”是由Tjalsma等人于2004年提出，他们在研究分泌蛋白在支持细菌存活中的作用时，将其作为一个统称来描述细胞的所有分泌蛋白和分泌机制。如今，分泌组被定义为“在任何特定时间和条件下，细胞、组织、器官或生物体通过已知或未知的分泌机制在细胞外空间分泌的蛋白质的总称”。它包括许多不同类型的分泌蛋白，含有蛋白质组中近30%的成分。了解不同发育、生长时期和不同生理、病理条件下及不同类型细胞分泌蛋白表达的特点对认识生命过程具有重要意义。分泌蛋白质组的研究有助于找到直接与特定生理或病理状态相关的生物分子，为从分子水平上认识疾病的发生和发展过程提供理论依据，也为设计作用于特定靶分子(target molecule)的药物筛选奠定基础。目前利用蛋白质组学(proteomics)技术对分泌蛋白进行着广泛和深入的研究，即分泌蛋白质组（Secretome）。尽管分泌蛋白可以通过大多数免疫检测技术轻松检测到，但对于分泌组研究而言，主要的挑战在于蛋白质丰度的动态范围广以及蛋白质的数量多。

 

分泌组检测的3大难题

 

1. 多重蛋白检测（高通量）

2. 低丰度蛋白检测（高灵敏）

3. 修饰检测

 

高通量抗体芯片解决3大难题

 

抗体芯⽚是⼀种⾼通量的蛋⽩质免疫检测分析技术，将多种不同的捕获抗体点制在固相⽀持物上，每种抗体孤⽴成点，抗体之间不相互影响，呈⽅阵排列，结合了抗原抗体反应⾼特异性、高灵敏度以及基于阵列高集成度的优势。实现了微量样本检测大量蛋白的目的，迎刃解决分泌组检测的3大难题！

 

高通量：RayBiotech高通量抗体芯片拥有双抗夹心法平台及生物素标记法平台，能够实现最高定量检测1200个蛋白，半定量最高检测8000个蛋白。包括炎症因子、凋亡因子、生长因子、肥胖因子、血管因子、白介素等各个疾病相关的因。

夹心法平台可实现最高1200个蛋白定量检测

标记法平台可实现最高8000 

 

高灵敏：通过荧光扫描捕获信号，高动态范围检测的更多层次信号，定量芯片可对目的蛋白进行pg/ml级别的检测；

修饰检测：多重组学将多个层次的生物分析结合在一起，以提供对复杂细胞系统的综合、全面的看法。这种方法可以为发现和改变正常发育、细胞和组织水平的反应以及疾病状态提供途径。RayBiotech提供1000-8000个蛋白的表达水平、磷酸化修饰水平、糖基化修饰水平检测。

 

分泌蛋白组在多组学研究中的重要性

 

    继人类基因组测序完成以后，研究人员已经能够分析无数个疾病相关的基因表达。然而，由于基因的转录、代谢物水平改变以及蛋白表达水平、修饰水平改变等多种因素影响，导致的许多疾病仅仅从一个水平的研究是不能获得对疾病状态的全面了解的。组学技术极大程度地推动了生命科学和人类健康研究的发展，研究者们已经开始逐渐提高了对转录组、代谢组、蛋白质组的关注度。

 

    蛋白质是生命的体现者，与疾病相关的基因，最终也要通过特定的蛋白质来起作用才会导致疾病。在蛋白质组研究中，除了要解决检测范围广的问题，还需要面对很多低丰度，难以检测的蛋白的挑战。抗体芯片以其高通量、高灵敏度、以及能检测蛋白修饰的特点，可以广泛、准确获得人体内环境蛋白的变化，进而评估疾病发生的可能。在发现新药物靶标、疾病标志物和治疗药物研究上均能起重要的作用！

 

Nature Microbiology（30.964）|多组学研究慢阻肺病呼吸道菌群-宿主互作机制

 

抗体芯片检测平台

 

    近期，国务院常务会议决定，确定专项再贷款与财政贴息配套支持部分领域设备更新改造，覆盖公立和非公立医疗机构，每家医院贷款金额不低于2000万元，贴息背景下RayBiotech各设备将助力完成有需要的单位完成平台建立！

 

蛋白芯片自动仪

    分泌蛋白组学通常使用的是血清、血浆、尿液、唾液、痰液、脑脊液、房水等，此类型多数为临床标本。这便涉及到大标本量的队列研究。当检测大量标本时，将会消耗检测者的大量时间用于分液，加样等。为节省检测者的操作时间，RayBiotech推出蛋白芯片自动仪。

                 型号：RPAW-3001

仪器介绍

  

Raybiotech蛋白芯片工作站是获得专利授权的创新产品，它将蛋白芯片检测分成了几个独立的阶段，从样本信息收集、试剂预处理，到免疫反应的测定及独立的洗板操作，每个阶段都由相应的独立模块完成，确保实验的精确度和稳定性。同时仪器配套的软件拥有很高的灵活性，可以满足多种免疫测定的需求。

 

仪器特点

  

高通量多重检测从未如此简单

• 全自动蛋白芯片操作

• 良好的精密度，准确度和可靠性

• 兼容 96-孔板模式 (ELISA 和 EIA)

• 提高处理生物样本安全性

• 先进的液体处理模式

• 简单易用的操作界面

 

仪器优势

  

首先，Raybiotech蛋白芯片工作站是一种全自动系统。其采用了最先进，最智能的工作站技术，可以自动识别加载的样本和芯片类型，并自动选择检测程序，避免了人工输入所带来的误差。

 

第二，Raybiotech蛋白芯片工作站具有极高的精确度和准确性。不同批次的孵育温度差可以控制在0.2°C以内，搭配精确的加样量控制系统，确保每一次检测结果的稳定性和重复性。

 

第三，Raybiotech蛋白芯片工作站是一种全开放式系统。其除了可用于蛋白芯片产品外，还可以兼容于传统的96孔板检测，例如ELISA或EIA。

 

第四，Raybiotech蛋白芯片工作站大大地提高了实验的安全性。其全自动化的操作减少了操作人员与生物样本的接触，从而避免了潜在的生物安全风险。

 

第五，Raybiotech蛋白芯片工作站具有高效性。其能同时对上百个样本进行四个不同的检测实验，极大地提高了检测效率，降低了实验时间及成本。

 

最后，Raybiotech蛋白芯片工作站使用方便，其配套的软件直观灵活。无论是编写操作步骤还是监控实验进程，都用清楚明了的图形进行展示，极大地降低了使用难度。

 

仪器参数

 

液体处理系统

功能：移液、配制、稀释、分装、多样化配制

洗头类型：一次性枪头

通道数：2个独立通道

移液原理：气动置换

移液速度：可调

可同时支持的吸头种类：300ul,800ul

移液范围：10-1000ul/Increment: 0.1ul

移液精度：吸头类型/体积/精度/CV

(1) 300ul/100ul/1.0%/≤0.75%

(2) 800ul/100ul/1.0%/≤0.75%

 

特殊功能

吸头实时监控、液面监控、凝块监控、管体积监控

 

孵育温度

室温-60℃

 

控温误差

±0.5℃

 

振荡速度

室温-60℃

 

应用范围

可同时用于蛋白芯片和ELISA检测的自动化操作

 

通量

单批实验可完成4块ELISA板，16块芯片的操作

 

自动化

实现了样本的稀释、扫码、自动上样、温控振荡孵育、洗板等自动操作

 

2

蛋白芯片扫描仪

分泌蛋白在体液中往往多数为一些表达丰度非常低的细胞因子及少数表达丰度较高的蛋白质。RayBiotech采用亲和力强，灵敏度高的抗体以提高抗体芯片的灵敏度，且自产出高灵敏度的扫描仪。而且, 大多数扫描仪的信号动态范围小于10的四次方，该线性范围难以同时检测丰度差异大的细胞因子。RayBio 芯片扫描仪采用特殊的光学扫描模式和算法，可实现10的6次方(20-bit 图像)信号动态范围，能在同一扫描中检测低表达和高表达细胞因子，获得更准确的定量分析。

 

 型号：RPAS 710G

仪器特点

 • 532nm和635nm两种波长可选

• 高性能，多功能，体积小，操作易

• 超高灵敏度，PMT共聚焦实时检测

• 延伸的动态范围模式下大于6个数量级

• 高分辨率：3-40 µm/像素

 

不同扫描仪扫描相同芯片

             

        其他扫描仪                 RayBio扫描仪

 

仪器参数

 

光学参数

分辨率：3-40 µm/像素

检测波长: 532 nm或者635nm

可检测荧光标记物：532 nm: Cy3, Alexa 546, Alexa 555;   635nm: Cy5, Alexa 647, Alexa 660, Draq5

检测类型：PMT共聚焦实时检测

光电倍增：0-100%线性（每步1%）

聚焦：自动聚焦/手动聚焦

激光功率：固定激光器

动态范围:正常情况下大于4个数量级

延伸的动态范围模式下大于6个数量级

均一性:< 5% CV

 

软件参数

接口: Ethernet接口

图像格式: TIFF格式(16-bit和20-bit灰度）

软件特性：自动PMT设置，自动对点。扫描与分析批量模式，质量控制模块，图像分析。数据标准化。标准文件格式，强大插件功能

图像大小：约256mb。整张玻片的图片文件为10µm

对点工具：使用gal 文件或手动创建grid

数据输出形式：.gpr文件，txt文件(兼容所有数据分析软件)

系统兼容性：Windows(XP，XP X64，VISTA，7，8和10)，Linux

 

其他参数

扫描区域: 22 x 74 mm²

图像格式: TIFF格式(16-bit和20-

扫描速度: 1-35行/秒 3.55分钟/张

自动读码

扫描片子规格：标准玻片25x75mm2。宽度：25-26mm；长度：75-76mm；厚度：0.9-1.2mm