《Cancer Cell》研究揭示：髓母细胞瘤“重男轻女”？YAP1-CD276轴是治疗关键

杂志名称：Cancer Cell

影响因子：56.1

文章题目：Male-biased Yap1-Cd276/B7-H3 axis for immune evasion in medulloblastoma（雄性偏倚的Yap1-Cd276/B7-H3轴在髓母细胞瘤中介导免疫逃逸）

第一作者：Nourhan Abdelfattah

通讯作者：Kyuson Yun

通讯作者单位：休斯顿卫理公会研究机构神经科等

本实验所用产品：RayBiotech小鼠细胞因子抗体芯片（ 货号：AAM-CYT-1000，检测小鼠样本中96种细胞因子）

实验样品类型：细胞上清

为探究Yap1在SHH-MB中的体内功能，构建了SG自发MB模型，并将其与Yap1-flox小鼠杂交得到YSG（Yap1缺失）小鼠。结果显示，100% SG小鼠在出生后31天内死亡；性别分层分析显示，76%的雄性YSG小鼠生存超过31天，而雌性仅43%，Yap1敲除显著延长雄性生存期，但对雌性无显著影响，表明Yap1功能具有雄性偏倚。

流式细胞术及scRNA-seq分析显示，Yap1敲除后雄性YSG肿瘤中CD45⁺免疫细胞和CD3⁺ T细胞浸润显著增加，且CD8⁺ T细胞活化标志（Tbx21, Gzmk, Nkg7）上调，呈现炎症性表型。而雌性YSG肿瘤中虽也有T细胞浸润，但CD8⁺ T细胞耗竭标志（LAG3, PD1）和Treg比例显著增高。体外共培养实验证实，雄性YSG肿瘤细胞可显著促进T细胞增殖。体内CD8⁺ T细胞清除实验完全取消雄性YSG的生存优势，证实CD8⁺ T细胞是介导雄性生存获益的关键效应细胞。

为探究Yap1调控免疫微环境的分子基础，利用RayBio抗体芯片（AAM-CYT-1000），比较了对照与Yap1-KO原代Ptch;p53 MB肿瘤球细胞的条件培养基。结果显示，Yap1缺失导致11种蛋白显著下调，包括CSF、IGFBP-3、IL-1α、IL-9、TCA-3、MCP-5和MMP-3等，其中可募集T细胞、单核细胞和中性粒细胞的趋化因子CCL5（RANTES）在Yap1-KO上清液中升高超过18倍。结合ELISA、RNA-seq验证结果提示，Yap1直接或间接抑制MB细胞中多种趋化因子和细胞因子的表达，而Yap1缺失可解除这一抑制，从而促进T细胞等免疫细胞的募集与活化。

单细胞和bulk RNA-seq分析显示，Cd276/B7-H3在Yap1敲除后仅在雄性中显著下调，Western blot进一步验证蛋白水平降低。ChIP-seq发现YAP1直接结合Cd276上游调控区域。CD276阻断抗体或CD276-CSAN处理仅在雄性SG小鼠中显著延长生存期，且与Yap1敲除无叠加效应，提示YAP1-CD276处于同一信号轴。在女性中，仅当Yap1和Cd276同时缺失时才能激活T细胞，提示存在冗余机制。

基于167个YAP1直接靶基因，研究人员定义出23个YAP1激活基因和25个YAP1抑制基因。在人类MB数据集中，23个激活基因高表达仅与男性患者不良预后显著相关（p<0.05），而女性无相关性。类似结果在胶质母细胞瘤、肺鳞癌和间皮瘤TCGA数据集中得到验证，表明YAP1-CD276调控轴的雄性偏倚在不同癌种中具有保守性。

本研究通过多组学整合分析（ChIP-seq、scRNA-seq、bulk RNA-seq）结合流式细胞术和细胞因子抗体阵列，揭示YAP1-CD276轴在SHH-MB中发挥雄性偏倚的免疫逃逸功能。YAP1直接转录激活Cd276，抑制CD8⁺ T细胞浸润与活化，而这一机制在雄性中更为关键。此外，Yap1缺失可上调CCL5等多种趋化因子分泌，促进T细胞募集。CD276靶向治疗仅在雄性小鼠中有效，且YAP1靶基因特征仅对男性患者具有预后价值。本研究强调生物学性别是肿瘤免疫治疗不可忽视的变量，建议未来抗CD276临床研究应纳入性别分层分析。