中山大学×广州实验室：TNS通过多巴胺能回路与抗炎机制缓解玉玉症

在LPS诱导的急性抑郁模型、慢性束缚应激（CRS）模型和PTD模型中，TNS（40 Hz, 0.2 mA, 60分钟/天，持续10天）显著逆转了抑郁样行为。与假手术组相比，TNS组小鼠在旷场实验（OFT）中中心探索时间增加（P<0.01），蔗糖偏好实验（SPT）中偏好率升高（P<0.001），悬尾实验（TST）中不动时间减少（P<0.001）。各组间总运动距离无显著差异，排除了运动能力混杂因素。

化学遗传学激活Trpv1-Cre小鼠三叉神经节（TG）中TRPV1+神经元（AAV-DIO-hM3Dq + CNO）可复现TNS的抗抑郁效果，表现为OFT中心时间增加、SPT升高、TST不动时间减少（P<0.01）。而激活Tac1-Cre或Piezo2-Cre神经元无显著效应。免疫组化显示，hM3Dq-EGFP与TRPV1共定位率达81.08%±4.29%。抑制TRPV1+神经元（AAV-DIO-hM4Di + CNO）则完全消除了TNS的抗抑郁效应，行为学指标回落至PTD对照组水平（P<0.001）。

LC-MS检测显示，PTD小鼠脑组织中多巴胺（DA）水平在TNS治疗后显著升高，恢复至假手术组水平。免疫荧光显示，TNS治疗后VTA中ΔFosB（慢性神经元激活标志物）表达显著增加，其中86.00%±4.69%的ΔFosB+细胞与酪氨酸羟化酶（TH）共定位，提示特异性激活多巴胺能神经元。在体钙成像（GCaMP6s）记录显示，TNS刺激后VTA DA神经元钙信号在0-2秒内迅速升高，约6秒恢复基线。对照刺激（前肢/后肢）无效应。

利用三重重组酶策略（PVN注射AAV-hSyn-Cre，NAc注射AAV-Retro-DIO-FLP，VTA注射AAV-fDIO-hM3Dq）选择性激活PVN-VTA-NAc通路。化学遗传学激活该回路10天显著缓解PTD小鼠抑郁样行为，效果与TNS相当（SPT: P<0.001；OFT中心时间: P<0.01；TST: P<0.001）。抑制该回路（hM4Di）则完全阻断TNS的抗抑郁效应，行为指标回落至PTD对照组水平。

在野生型小鼠PVN注射AAV-C1V1-mCherry（光遗传），NAc注射GRAB-DA多巴胺荧光探针。光遗传激活PVN-VTA通路（589 nm, 20 ms, 20 mW）诱导NAc中GRAB-DA荧光信号瞬时升高。TNS刺激（0.2 mA, 2 s, 40 Hz）同样诱导NAc中GRAB-DA荧光增强。系统性给予氟哌啶醇（多巴胺受体拮抗剂）可完全阻断光遗传和TNS诱导的荧光信号，证实信号特异性。

利用shRNA在NAc中敲低D1/D2或D3受体。治疗阶段（第20天）：D1/D2敲低组抗抑郁效应被显著削弱，行为评分与PTD组无差异；D3敲低组也出现部分效应减弱。治疗后阶段（第27天，停刺激后10天）：仅D3敲低组失去TNS长期获益，行为评分回落至PTD水平（P<0.001）；D1/D2敲低组仍维持行为改善。利用抗体芯片（RayBio GSM-INF-1，检测40种小鼠炎症微量表达细胞因子）对脑脊液进行细胞因子谱分析显示：第20天，TNS在对照组和D1/D2敲低组中降低IL6、TNFα、MCP-1、IL1β、IL10、IL4等炎症因子，而D3敲低组中无此抗炎效应；第27天，D3敲低组细胞因子水平仍维持高位，与PTD组相似。

文章中利用细胞多因子检测技术（抗体芯片）证明了TNS通过D3受体依赖的方式抑制神经炎症，从而实现长期抗抑郁效果。这一发现区分了D1/D2受体（介导急性行为效应）和D3受体（介导持续性抗炎和长期获益）的功能分工，为理解TNS的作用机制提供了关键的分子证据，建立了“D3受体-神经炎症-长期行为获益”这一完整的机制链条。