RayBio磷酸化检测芯片结合单细胞测序筛选非抑制小细胞肺癌（NSCLC）迁移及侵袭的关键靶标CD73/Axl

杂志名称：Proc Natl Acad Sci U S A

影响因子：9.4/Q1

文章题目：CD73 promotes non-small cell lung cancer metastasis by regulating Axl signaling independent of GAS6

一作：朱健洁

作者单位：苏州大学第一附属医院肺重症医学系

通讯作者：黄建安，刘泽毅

本实验所用产品：

AAH-PRTK（检测人类样本中71个RTK通路微量蛋白的磷酸化程度）；

ELH-5NTE

（Human 5'-Nucleotidase/CD73 ELISA Kit）

检测样本：细胞裂解液

研究目的：探讨CD73在介导非小细胞肺癌（NSCLC）转移中的作用，及探索其潜在的转导信号。

研究结果：CD73可以通过高尔基体运输途径分泌，分泌的CD73可以独立于GAS6直接结合位于Axl胞外结构域的R55位点激活AXI，靶向Axl可能是CD73高表达癌症患者的潜在治疗策略。

结果1

CD73增强细胞在NSCLC中的迁移和侵袭

单细胞测序、CD73敲低和过表达细胞Transwell实验、伤口愈合实验、CD73对NSCLC体内转移影响的体内实验，都表示了CD73具有介导细胞迁移及侵袭的能力。

结果2

CD73与NSCLC组织和细胞系中Axl活化相互作用并诱导其活化

利用AAH-PRTK磷酸化抗体阵列检测细胞裂解液，发现与对照细胞相比，cd73敲低细胞中的Axl磷酸化下调（a）。之后在WB实验、Co-IP、免疫共沉淀实验中，都证实了cd73表达改变会影响Axl磷酸化水平，且存在直接的互作关系。

结果3

可溶性CD73可以直接与Axl结合，从而诱导Axl活化

CD73过表达后在细胞上清中的浓度增加，且在淋巴结转移的肺癌患者血清中高表达。BIAcore实验、GST下拉试验结合SDS-PAGE和WB分析鉴定表明Axl的n端胞外结构域可以直接与CD73结合，且不受Axl公认的受体激活配体GAS6的影响。

结果4

CD73通过抑制E3泛素连接酶CBLB的表达来稳定Axl的表达，且可通过Smad3促进NSCLC细胞转移信号通路。

用CHX处理过表达cd73的A549和H226细胞，抑制蛋白合成后发现细胞中CD73的过表达延长了Axl蛋白的半衰期。

KEGG通路分析显示，Axl与TGF-ß通路相关，WB结果显示，CD73敲低后，pSmad3、Snail、MMP2、MMP9、N-cadherin和Vimentin均下调。